实时荧光定量PCR注意事项

　　1.按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.开机顺序：先开电脑,待电脑*启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件,进行实验.关机顺序：确认实验已经结束后,首先关闭信号收集软件,然后关掉定量PCR仪主机的电源,关闭电脑.

　　2.应该定期备份您的实验数据,备份频率推荐每周一次,用光盘刻录.同时您也应该备份定量PCR仪的各种纯荧光光谱校正文件、背景文件和安装验证实验数据,这些文件所在的目录是C：/Appliedbiosystems/SDSDocument.

　　3.良好的实验室环境有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.推荐做到以下几个方面：

　　电源：推荐配备合适的UPS或稳压器.

　　通风：仪器的通风应该没有阻挡.

　　温度：推荐实验室配备空调,温度应该控制在10-30°C之间.

　　湿度：20-80%；对于潮湿的省份,推荐实验室配备除湿机.

　　空间：易于操作,安全.

　　4.怎样判断定量PCR仪的样本加热块是否被污染?怎样清除污染

　　一个办法是运行背景校正反应板,当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号,则表明该孔可能被荧光污染物.另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下,执行ROI的校正,当某个孔的信号明显高出其他孔时,则表明该孔被污染.

　　清除样本加热块污染的步骤如下：用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中.吹打数次.将废液吸入废液杯中.重复以上步骤：乙醇三次,去离子水三次.确认反应孔中的残留液体蒸发完.