数字PCR的运行阶段

　　数字PCR是一种核酸检测和定量的新方法。同传统PCR以及qPCR相比，增加了一步分液的操作，将几十微升的已经配好的包含有引物、模板、buffer、酶等组分的PCR反应体系分隔成了众多微小的、独立的反应体系，这样能够直接数出DNA分子的个数，对起始样品定量，通过将一个样本分成几万到几百万份，分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。如下图：
 

　　PCR 运行可以分为三个阶段：
 

　　指数期
 

　　每个循环积聚的产物准确加倍(假定 100% 反应效率)。该反应具有高度特异性和准确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。
 

　　线性期(高变异性)
 

　　随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。
 

　　平台期(终点：使用传统方法进行凝胶检测)
 

　　反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统 PCR 进行测量，又称为终点检测。
 

　　数字PCR检测的是游离DNA，采血管为游离DNA管，采样5-10ml。检测过程包括核酸提取、芯片制备、PCR扩增、芯片阅读、结果分析，实现全程基本自动化、封闭式操作，避免污染。无需培养，节省时间；高灵敏度，提高检出率；多色荧光检测，一管血可检测23个靶标，节省宝贵样本，帮助解决“检出率低”和“检测周期长”两大痛点，达到早期诊断、疗效监测的目的。